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Western低背景封闭及抗体增敏稀释液
所属分类:western实验应用试剂相关产品

产品型号:Western低背景封闭及抗体增敏稀释液

在western实验中,提高一抗和二抗的浓度,可有效的提高检测的灵敏度,并降低抗体孵育时间。而与此同时背景会相应提高,甚至将检测信号淹没在背景信号中。对于使用过的抗体,保存在奶粉溶液或BSA溶液中,很容易造成抗体的失活,并极易染菌变质。

产品介绍
Western低背景封闭及抗体增敏稀释液使用说明书 (初次使用本产品请仔细阅读本说明书)
        在western实验中,提高一抗和二抗的浓度,可有效的提高检测的灵敏度,并降低抗体孵育时间。而与此同时背景会相应提高,甚至将检测信号淹没在背景信号中。对于使用过的抗体,保存在奶粉溶液或BSA溶液中,很容易造成抗体的失活,并极易染菌变质。 培清科技开发的本产品,可有效实现western的快速,低背景封闭,并可有效提升抗原抗体反应速度,提高western灵敏度。您在不改变原有操作和试验系统的前提下,通过本产品可提高数十倍灵敏度(亲和力低的抗体提高的倍数更高)。本产品成分不影响磷酸化,乙酰化抗体检测,不影响过氧化物酶和碱性磷酸酶活性,适合荧光,发光,显色等检测。另外本产品允许室温存放和操作,不含有有毒物质如叠氮纳,硫柳汞钠。 本产品可单独使用,也可配合培清科技的另一个产品膜处理液,western灵敏度将进一步提升。 使用膜处理液后,需用漂洗液或去离子水漂洗3次,每次5分钟。然后再进行封闭。 包装规格: 100ml 一瓶 (室温避光保存,保存期1年,如产生微弱沉淀,不影响使用) 操作说明: 本产品的操作及抗体孵育与传统的奶粉溶液和BSA溶液一致,但封闭时间推荐10min-20min(可以但无需更长时间封闭), 封闭后可直接加入抗体进行后续试验。 参考信息:根据培清科技实验发现,在不影响背景的情况下,抗体浓度每提高一倍,检测灵敏度提高一倍,抗原抗体(包括一抗二抗)的固液两相反应在4℃真正达到反应平衡需要48h,但在前4个小时里基本可实现70%的结合量,所以即使再加大孵育时间10倍其灵敏度提升也非常有限度。在抗体浓度和孵育时间基本确定的情况下,要想继续大幅度提高检测灵敏度,就需要依赖二抗HRP的活性,及发光底物的灵敏性,培清科技开发了应该是目前市面上最灵敏的HRP发光液,其灵敏度超出thermo最好质量发光液的4倍,millipore的16倍,比pierce普通级发光液高出250倍(客户可简单将二抗倍比稀释后点在NC膜上进行曝光检测),所以在同样条件下,如果用pierce的普通发光液可以检测10pg抗原,那么利用培清科技的超敏发光液则可检出0.04pg抗原。另外,还有两个因素影响抗体灵敏性,一是抗原抗体的可结合性,这不仅取决于抗体的浓度和亲和力,还取决于膜上抗原的状态,培清科技开发的膜处理液及本封闭液(尤其是前者)可有效降低抗原表面自由能,使得抗原抗体更容易诱导契合。另一个影响因素就是背景,尤其是在使用高灵敏发光底物时,背景问题尤为突出,培清科技发现,微弱背景可大幅提升灵敏度,而过高背景则使正常信号淹没于背景之中。培清科技的此低背景封闭液可使WB获得高信噪比。
效果展示:

上下两图为相同的含GST融合蛋白的大肠杆菌裂解物,5倍倍比稀释的western结果。上图用传统的5%奶粉溶液进行的western封闭和抗体稀释,下图用本试剂操作,反应条件完全一样,如一起洗涤,同时孵育,一起曝光等。
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